Aulas práticas

ATIVIDADE DE LABORATÓRIO

Extrato de folhas - Pigmentação das folhas com 7° Ano 1 e 2

Extração de DNA de morango

INTRODUÇÃO:

Para análise de DNA de células eucariontes, a primeira etapa importante é o seu isolamento. O procedimento a seguir é utilizado para extrair grandes quantidades de DNA a partir de tecidos vegetais tal como bulho de cebola, morango, sementes de ervilhas, lentilhas, entre outros.

OBJETIVOS DA AULA:

1. Conhecer os princípios básicos da extração de material genético a partir de tecidos vegetais;
2. Familiarizar – se com o material genético responsável pela transmissão dos caracteres nos organismos vivos.

Na extração de DNA de células eucariontes, três passos são básicos:

1. Ruptura (química e física) das membranas celulares para liberação do material genético;
2. Desmembramento dos cromossomos em seus componentes básicos: DNA e proteínas;
3. Separação do DNA dos demais componentes celulares.

MATERIAIS:

1 saco plástico tipo "zip loc"

3 morangos (fresco ou congelado)

4  colheres de sopa de detergente sem corantes.

75 ml de água (~60 °C).

1 colheer de chá de sal grosso.

Álcool etílico gelado (pode ser álcool 70º g.l.- 96° g.l.)

Aparato filtrante: 1 filtro de papel com funil

Coador

Béquer ou copo transparente de vidro

Palito de madeira ou bastão de vidro

PROCEDIMENTO:

1. Marecer o material vegetal. No caso dos morangos, coloques – os numa sacola de plástico e com um bastão ou copo marecer os frutos. As lentilhas serão trituradas em liquidificador. Após triturar, coloque numa sacola de plástico e adicione a solução tampão.
2. Misture à solução: 4 colheres de sopa de detergente  incolor (neutro), 1 colher de chá de cloreto de sódio (sal) e 75 ml de água quente (~60 °C); amasse e misture tudo muito bem.
3. Coe a solução, com o auxilio do papel de filtro ou coador, transferindo – a para um tubo de ensaio ou béquer.
4. Cuidadosamente, adicione à solução álcool gelado e misture vagarosamente.
5. Os “fios” esbranquiçados e grudentos formados são aglomerados de muitas molécula de DNA e poderão ser “pescados” por meio de bastão de vidro ou um palito.

OBSERVAÇÕES:

Qual é a função do detergente? O detergente emulsiona gorduras, ou seja, atua nas membranas da célula que são formadas de fosfolipídeos, desestruturando-as.

Qual é a função do sal? O NaCl em solução dissocia-se em Na+ e Cl- . Estes íons

interagem com os fosfatos das moléculas de DNA, tornando-as neutralizadas e estabilizadas, mas menos solúveis na água.

Qual é a função do álcool etílico? O álcool etílico desidrata ainda mais as moléculas de DNA, retirando-as de solução. O resultado pode ser visualizado como uns filamentos esbranquiçados que são a várias moléculas de DNA emaranhadas.

Não é possível visualizar a dupla-hélice, pois esta estrutura só pode ser visualizada de modo indireto e através de aparelhos sofisticados.

Para que filtrar o extrato? A filtração retira os debris (restos) celulares. O filtrado contém o DNA e outras moléculas.

Fonte para pesquisa: http://genoma.ib.usp.br/educacao/Extracao_DNA_Morango_web.pdf 

ATIVIDADE DE LABORATÓRIO

Demonstrando a osmose em ovos de codorna

A maior dificuldade dos experimentos de osmose é encontrar membranas semipermeáveis que funcionem adequadamente, isto é, que permitam a passagem de água mas impeçam a passagem de soluto. Uma forma de superar essa dificuldade técnica é utilizar a membrana coquilífera, encontrada sob a casca dos ovos das aves. A seguir, sugerimos uma atividade que permite uma excelente demonstração de osmose, e que pode ser realizada facilmente pelos estudantes no laboratório, na sala de aula ou mesmo em casa. Deve-se lembrar, porém, que a membrana coquilífera é altamente permeável a sais. Por isso utilizamos uma solução de açúcar, e não uma solução salina, para essa demonstração.

Material

  
   4 ovos de codorna

   um recipiente médio (tigelinha, prato fundo etc.)

   2 copos de vidro

   água filtrada

   vinagre branco (de vinho, de arroz etc.)

   açúcar de cana (sacarose)

   etiquetas de papel

Procedimentos

1. Coloque o vinagre no recipiente e mergulhe os ovos, de modo a cobri-los completamente. Deixe-os assim por cerca de 24 horas ou até a total remoção da casca calcária. Lave-os bem sob água corrente.

2. Coloque a água nos copos, até cerca de metade da capacidade. Em um deles dissolva a máxima quantidade possível de açúcar (mais ou menos 5 ou 6 colheres de sopa), preparando uma solução altamente concentrada, viscosa como calda de doce. O outro copo ficará apenas com água. Etiquete os copos, identificando as soluções que eles contêm.

3. Coloque 2 ovos com a casca calcária removida em cada solução. Observe a forma e a consistência deles a cada 2 horas. Anote os resultados. Para observar os efeitos da osmose nos ovos é preciso primeiro remover a casca calcária, o que pode ser feito através da dissolução do carbonato de cálcio da casca pelo ácido acético presente no vinagre. Durante a reação de dissolução, observa-se intenso desprendimento de bolhas de gás carbônico junto à superfície do ovo. Essa reação está esquematizada a seguir.

Os ovos sem casca mergulhados em água filtrada incham devido à osmose, uma vez que sua solução interna, a clara (uma solução altamente concentrada de albumina), é hipertônica em relação ao meio. Já os ovos mergulhados na solução de açúcar murcham visivelmente, o que indica que essa solução é altamente hipertônica em relação à clara e que as moléculas de sacarose não atravessam a membrana coquilífera. Depois de observar o que ocorre nessa demonstração de osmose, é interessante transferir um dos ovos murchos da solução de açúcar para o copo de água filtrada, e um dos ovos inchados da água filtrada para a solução açucarada. Esse procedimento confirma os resultados.